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石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光

石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光

產品型號:

所屬分類:病理學檢測實驗

產品時間:2024-08-30

簡要描述:提供商: 上海研謹生物
服務名稱: 石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光
規格: 實驗服務
實驗周期: 1-2周

詳細說明:


石蠟冰凍切片TUNEL凋亡熒光



TUNEL凋亡熒光實驗原理

dUTP缺口末端標記(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling,TUNEL) 法檢測細胞凋亡的原理是當細胞發生凋亡時,DNA內切酶被激活,核小體間的基因組DNA被切斷,暴露的3-0H可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(TerminalDeoxynucleotidyl Transferase, TdT)加上帶有熒光素FITC標記的dUTP,從而可以通過熒光顯微鏡進行檢測。


TUNEL凋亡熒光實驗意義

1.TUNEL法是一種分子生物學與形態學相結合的研究方法,可對完整的單個凋亡細胞或者凋亡小體進行原位染色,可以準確反映細胞凋亡典型的生物化學和形態特征。

2.可用于石蠟切片、冰凍切片、培養的細胞等進行細胞凋亡檢測,靈敏度遠比一般的組織化學和生物化學方法要高。

3.操作簡便快捷,在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。


TUNEL凋亡熒光實驗步驟:

1.石蠟切片TUNEL顯色法:

①石蠟切片常規脫蠟至水,脫蠟劑= =甲苯,至水劑乙醇;

②PBS漂洗3*5 min; .

③加入蛋白酶K工作液379C反應15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

④4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液,其中含有TdT酶、熒光標記液、TUNEL檢測液;

⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液,37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧選擇是否用DAPI復染細胞核;

⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進行觀察。


2.冰凍切片TUNEL顯色法:

①新鮮組織經處理后,立即在恒冷冰凍切片機內切片,厚度為5~6 um;

②防脫玻片,貼片,室溫陰干約12h;③4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定10 min,PBS漂洗3x5 min;

④浸入封閉液(3%H20O2) 室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

⑤浸入通透液(0.1%Triton X-100溶于PBS中),室溫通透30 S-2 min;

⑥參考使用試劑盒的說明書配制適量的TUNEL檢測液,其中含有TdT酶、熒光標記液、TUNEL檢測液;

⑦樣品上加入適量TUNEL檢測液,37°C避光孵育60 min, PBS漂洗3x5 min;

⑧選擇是否用DAPI復染細胞核:

⑨使用抗熒光淬滅封片液封片后在熒光顯微鏡下進行觀察。


結果展示




實驗完成周期及交付標準

1.實驗周期: 1-2周

2.交付標準:蠟塊、切片、染色圖片.實驗報告(實驗步驟、試劑、耗材等)


需確認的信息

1.樣本的種屬

2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)

3.是否提供試劑盒

4.拍照要求


實驗代做服務:

ELISA試劑盒免費代檢測

CCK8檢測

基因組DNA提取


蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動物模型服務

流式細胞檢測

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實驗

細胞劃痕

鈣離子濃度檢測

掃描電鏡實驗

microRNA測序

動物實驗

探針合成

ATP/ADP檢測

石蠟/冰凍切片

定點突變

線粒體膜電位(MMP)檢測

細胞生長曲線的測定

藥理毒理動物實驗


免疫共沉淀

真核表達載體構建

染色質免疫沉淀CHIP

非標定量(Label-free)實驗




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